數字PCR儀是一種核酸分子一致定量技術✘₪。目前有三種方法用於核酸分子的定量◕·,普通PCR半定量透過灰度進行定量;熒光定量PCR透過Ct(Cq)值進行相對定量;數字PCR是較新的定量技術◕·,基於單分子PCR方法來進行計數的核酸定量◕·,是一種一致定量的方法✘₪。主要採用微滴化方法◕·,將大量稀釋後的核酸溶液分散至晶片的微反應器或微滴中◕·,每個反應器的核酸模板數少於或者等於1個✘₪。這樣經過PCR迴圈之後◕·,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光訊號◕·,沒有模板的反應器就沒有熒光訊號✘₪。根據數字PCR 反應單元總數和有熒光訊號的單元數以及樣品的稀釋倍係數◕·,就可以得到樣本的最初複製數(濃度)✘₪。
注意✘₪·:
1. Sock時◕·,溫度應設為10℃◕·,時間不要超過30分鐘✘₪。溫度過高◕·,時間過長◕·,易導致儀器的損壞✘₪。
2. 操作時◕·,要嚴格遵守以上原則◕·,及時記錄儀器執行的情況✘₪。
保養✘₪·:
1.樣品池的清洗
先開啟蓋子◕·,然後用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min◕·,然後清洗被汙染的孔;用微量移液器吸取液體◕·,用棉籤吸乾剩餘液體;開啟PCR儀◕·,設定保持溫度為50℃的PCR程式並使之執行◕·,讓殘餘液體揮發去除✘₪。一般5~10min即可✘₪。
2.熱蓋的清洗
對於數字PCR儀◕·,當有汙染出現◕·,而且這一汙染並非來自樣品池時;或當有汙染或殘跡物影響到熱蓋的鬆緊時◕·,需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面◕·,確保樣品池的孔鏡乾淨◕·,無汙物阻擋光路✘₪。
3.儀器外表面的清洗
清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂◕·,但達不到消毒的效果✘₪。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進行清洗✘₪。
4.更換保險絲
先將PCR儀關機◕·,拔去插頭◕·,開啟電源插口旁邊的保險盒◕·,換上備用的保險絲◕·,觀察是否恢復正常✘₪。
維修✘₪·:
1.PCR儀器需要定期檢測◕·,視製冷方式而定一般半年至少一次✘₪。
2.PCR反應的要求溫度與實際分佈的反應溫度是不一致的◕·,當檢測發現各孔平均溫度差偏離設定溫度大於1~2℃時◕·,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差✘₪。
3.PCR反應過程的關鍵是升╃₪、降溫過程的時間控制◕·,要求越短越好◕·,當PCR儀的降溫過程超過60s◕·,就應該檢查儀器的製冷系統◕·,對風冷製冷的PCR儀要較*地清理反應底座的灰塵;對其他製冷系統應檢查相關的製冷部件✘₪。
4.一般情況如能採用溫度修正法糾正儀器的溫度時◕·,不要輕易開啟或調整數字PCR儀的電子控制部件◕·,必要時要請專業人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修✘₪。